小六儿最近都没有什么帖子更新，为什么呢，因为我养了两年多的细胞竟然是错的！！！所以明明已经做完的细胞实验，需要重新返工！！！今天终于跑完了最后一板qPCR，跟大家分享一下我失败返工的心路历程，我真的相信这种经历不是我一个人！！！小六儿养的细胞是HUVEC(人脐静脉内皮细胞)。最开始决定养这个细胞的时候，在网上查了很多相关的培养冻存传代的条件和形态图片，最终总结出来的经验是：b) HUVEC细胞生长速度相对较快，1-2天可换一次液；c) HUVEC细胞长满之后镜下会显得有点“脏”，会看到很多小黑点，但属于正常现象；d) HUVEC细胞的培养基中可加内皮细胞生长因子ECGS和肝素，也可以和普通细胞的培养条件一样，并无太大影响；e) HUVEC没有什么特定的培养基，M199、DMEM、1640或者高糖DMEM都可以用来养这个细胞；f) HUVEC细胞作为贴壁细胞，需要胰蛋白酶进行消化传代。胰酶浓度并无固定选择，0.25%或0.04%或其他浓度都可以，差异就在消化时间长短上，但是胰酶中一定要有EDTA。以上经验来自丁香园、小木虫、百度百科，甚至包括PubMed里查到的文献，一句话概括：就是好养！
最开始的细胞来自隔壁实验室同学的友情馈赠，细胞状态也和上图一样完美。然而，所有的事情发生在那个阴天！本人感冒了，在处理细胞的过程中实在没忍住，打了一个喷嚏（有戴口罩），从此之后，我的HUVEC的状态就越来越差，虽没有绝种，但是生长速度和状态都不像上图那么好了，这期间也不断出现各种各样的污染问题，最后就慢慢的game over了。还好导师大人可怜我，同意让我去试剂公司购买细胞。我选择了一家很正规的试剂公司（这里就不提公司名字了），下单之后厂家给我的回复是：HUVEC细胞很难养，并且生长速度很慢，请耐心等候。那一刻我就有点质疑，这个细胞我养过啊，怎么会慢呢？等了将近一个月的时间，我收到这个细胞。我第一时间进行了镜下观察，然后就惊呆了，这和我印象中的HUVEC完全不同。下图是我刚收到细胞时拍摄的照片，虽然照片清晰度不高，但是能很明显的看出来，这和之前养的细胞绝对不是一家人！镜下观察给我的第一感觉是HUVEC发生了分化或者说是老化的情况，有些区域甚至出现了类似血管的形态！以我个人养细胞的经验来看，总像是一种原代细胞传代了6、7代之后的样子。（请记住我此刻笃定的样子，即将啪啪打脸！）
我很快联系了试剂公司的技术顾问，在提供了我拍摄的图片后，技术人员给我的回复是：“这就是HUVEC正常的形态，您可以参照ATCC官网贴出的金标准进行比对，也可以查看我们提供的STR鉴定证书，都是没问题的。”一瞬间五雷轰顶，以前总说养细胞像是养孩子，可我这个孩子还不是亲生的！！！我马上查询了ATCC官网对这个细胞的培养条件介绍：a) 该细胞的基本培养基是F-12K，F12K+10%FBS+1%ECGS+0.1mg/ml肝素；c) 属于生长缓慢的细胞系，倍增时间大约5-6天。培养基应每隔48小时更换一次。如果细胞密度没有达到50%，可以72小时不换液；d) 这种细胞在长到70%密度之后会产生一些细胞碎片或漂浮物，细胞密度越高，漂浮物越多，但这属于常规现象。所以当细胞密度达到80%的时候就可进行传代。
并且公司给我提供的STR鉴定证书和ATCC官网是一致的。
这还真是给了我一个很大的教训！省下的金钱只能用更多的时间来弥补，然后又花了金钱！ATCC是目前世界上最大的生物库，向全球发布细胞、病毒、细菌等金标准。但是如果直接在ATCC上购买细胞，需要等的时间太长，而且价位什么的都不是让人很开心，所以很多实验室都会通过国内的一些试剂公司购买。但是也并非所有公司的细胞来源都是ATCC，有很多规模不大的公司可能都是从别人家买回来，养一养再卖出去，这种问题不仅出在HUVEC，很多细胞养着养着就变了样可能都是这个原因，更何况还有很多同学并不是通过购买的途径，而是像我一样通过实验室之间的馈赠。慢慢的就出现了这种情况——很多科研平台甚至是PubMed中查询到的大部分文献，细胞状态都是不对的。我也见过身边养RAW264.7细胞的同学，细胞形态养的很圆润，但是ATCC给出的细胞形态却是略微有些触角或是偏椭圆的形态，同学给出的解释是，ATCC这个不对，RAW如果出现触角，那就是有些分化了。
那么，到底谁才是金标准？这种慢性的、恶性循环造成的结果就是大部分人都会选择服从大多数，所以我当时才会和技术人员据理力争，认为就是他们出售的细胞有问题。仔细想想，这种情况挺可怕的，如果没有一定的标准，如果不看重标准，这样传播下去，大家还会知道什么是对的什么是错的吗？可是，科研又是一个特别需要严谨态度的事情啊！（戳相关阅读第一条可查看类似推文）
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